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從基礎到進階:徠卡倒置顯微鏡操作指南

更新時間:2025-07-18      點擊次數:157
  徠卡倒置顯微鏡憑借其靈活的物鏡配置、適配多種樣本的載物臺設計,成為細胞培養、組織切片、材料科學等領域的研究利器。掌握其操作技巧,既能提升實驗效率,也能延長儀器壽命。以下從基礎操作到進階技巧,分步驟詳解。
 
  ?一、基礎操作:規范啟動與樣本觀察
 
  ?1.開機與環境準備
 
  接通電源后,打開顯微鏡主機電源開關,待目鏡視野亮起后,開啟熒光光源(若需熒光觀察)。注意:熒光光源需預熱5-10分鐘以達到穩定光強,避免頻繁開關以延長燈泡壽命。
 
  調節顯微鏡底座至穩定狀態,避免震動影響成像(建議放置在防震臺或厚橡膠墊上)。
 
  ?2.樣本放置與調焦
 
  將培養皿、多孔板或載玻片置于載物臺中央,確保樣本位于物鏡正下方(倒置顯微鏡物鏡朝上,樣本從上方放置)。
 
  先使用低倍物鏡(如4X或10X)粗調焦:通過粗調旋鈕緩慢下降物鏡至接近樣本(注意避免觸碰),再反向緩慢旋轉至圖像清晰。切換高倍物鏡(如20X、40X)時,需微調細調旋鈕,因物鏡工作距離短,操作需更輕柔。
 
  ?3.光路與成像調節
 
  調節聚光鏡高度與光圈大?。旱捅剁R觀察時,聚光鏡位置較低、光圈調大;高倍鏡時需升高聚光鏡、縮小光圈以提升對比度。
 
  通過目鏡觀察,調整粗/細調焦旋鈕至圖像最清晰,避免過度調焦損壞物鏡或樣本。
 
  ?二、進階技巧:功能拓展與精準成像
 
  1.?熒光觀察與通道切換
 
  若需熒光成像,先確認濾光塊已切換至目標熒光通道(如DAPI、FITC、TRITC),通過顯微鏡側面的濾光塊轉盤操作。
 
  調節熒光激發光強度:避免過亮導致熒光淬滅,可通過電壓調節旋鈕或軟件控制(若連接電腦)逐步增強光強,直至信號清晰且背景噪聲低。
 
  ?2.相差與DIC成像
 
  相差觀察:插入相差環(需與物鏡匹配,如10X物鏡對應10X相差環),調節聚光鏡相位板位置,增強無染色樣本(如活細胞)的對比度。
 
  DIC(微分干涉對比)觀察:安裝DIC棱鏡,通過調節棱鏡偏振角度與光強調節旋鈕,突出樣本的細微結構(如細胞骨架、細胞膜邊緣)。

 


 
  ?3.圖像采集與參數優化
 
  若連接數碼攝像頭,通過軟件(如Leica Application Suite)設置曝光時間、增益值:高倍鏡下需縮短曝光時間(避免過曝),活細胞成像可適當提高增益以提升亮度。
 
  多通道拍攝時,需分別采集明場、熒光或相差圖像,并在軟件中疊加或對比分析,確保參數一致(如同一視野、相同曝光時間)。
 
  ?三、維護與注意事項
 
  1.?物鏡清潔:使用專用鏡頭紙或吹氣球清理物鏡表面灰塵,避免直接接觸鏡頭;若沾染液體,用無水乙醇輕輕擦拭。
 
  2.?載物臺保養:避免尖銳樣本劃傷載物臺表面,使用后及時清理殘留培養基或液體。
 
  ?3.關機流程:關閉熒光光源(需冷卻至室溫后再斷電),將物鏡轉至低倍位置(避免高倍物鏡長期受壓),最后關閉主機電源。
 
  徠卡倒置顯微鏡的操作從基礎調焦到進階成像,每一步都需兼顧規范與細節。掌握其核心技巧,不僅能高效獲取高質量圖像,更能充分發揮儀器性能,為科研與實驗提供可靠支持。
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